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三聚氰胺HPLC检测方法之固相萃取(SPE)法

来源:中国生物器材网  类别:技术文章  更新时间:2013-09-23 11:31:50  阅读
1. 依据:GB/T 22388—2008
2. 原理:试样用三氯乙酸溶液-乙腈提取,经阳离子交换固相萃取柱净化后,用高效液相色谱测定,外标法定量。
3. 试剂与材料:除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的一级水。
3.1甲醇:色谱纯;
3.2乙腈:色谱纯;
3.3氨水:含量为25%~28%;
3.4三氯乙酸;
3.5柠檬酸。
3.6辛烷磺酸钠:色谱纯;
3.7甲醇水溶液:准确量取50 mL 甲醇和50 mL 水,混匀后备用;
3.8三氯乙酸溶液(1%):准确称取10 g 三氯乙酸于1 L 容量瓶中,用水溶解并定容至刻度,混匀后备用;
3.9氨化甲醇溶液(5%):准确量取5 mL 氨水和95 mL 甲醇,混匀后备用;
3.10离子对试剂缓冲液:准确称取2.10 g 柠檬酸和2.16 g 辛烷磺酸钠,加入约980 mL 水溶解,调节pH 至3.0 后,定容至1L 备用。
3.11三聚氰胺标准品:CAS 108-78-01,纯度大于99.0%;
3.12三聚氰胺标准储备液:准确称取100 mg(精确到0.1 mg)三聚氰胺标准品于100 mL 容量瓶中,用甲醇水溶液(3.7)溶解并定容至刻度,配制成浓度为1 mg/mL 的标准储备液,于4℃避光保存。
3.13 阳离子交换固相萃取柱:混合型阳离子交换固相萃取柱,基质为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯高聚物,60 mg,3 mL,或相当者。
3.14 定性滤纸。
3.15 微孔滤膜:0.2 μm,有机相。
3.16 氮气:纯度大于等于99.999%
4. 仪器和设备
4.1 高效液相色谱(HPLC)仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。
4.2 分析天平:感量为0.00001 g和0.01 g。
4.3 离心机:转速不低于10000 r/min。
4.4 天津恒奥超声波提取器。HS,HU系列
4.5 天津恒奥固相萃取装置。HSE-12D
4.6 天津恒奥氮吹仪。HGC,HSC系列
4.7 天津恒奥涡旋振荡器。HMS-350
4.8 天津恒奥真空泵。HPD-25
4.9 天津恒奥精密气体稳流调节阀。
4.10 具塞塑料离心管:50 mL。
5. 样品处理
5.1 提取
称取(液态奶、奶粉、酸奶、冰淇淋和奶糖等)2 g(精确至0.01 g)试样于50 mL具塞塑料离心管中,加入15 mL三氯乙酸溶液(3.8)和5 mL乙腈,超声提取10 min,再振荡提取10 min后,以不低于10000 r/min离心30 min。上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后,用三氯乙酸溶液定容至25 mL,移取5 mL滤液,加入5 mL水混匀后做待净化液。
注:若样品中脂肪含量较高,可以用三氯乙酸溶液饱和的正己烷液-液分配除脂后再用SPE柱净化。
5.2 活化
依次用3 mL 甲醇、5 mL 水活化(3.13)阳离子交换固相萃取柱。旋转固相萃取装置前的精密气体稳流调节阀使洗液流速不超过1 mL/min
5.3 上样
将5.1中的待净化液转移至固相萃取柱(5.2)中。
5.4 淋洗
依次用3 mL水和3 mL甲醇洗涤,抽至近干后,
5.5 洗脱
用6 mL氨化甲醇溶液(3.9)洗脱,用试管收集洗脱液。整个固相萃取过程流速不超过1 mL/min。5.6 浓缩
洗脱液于50℃下用氮气吹干,残留物(相当于0.4 g样品)用1 mL流动相定容,涡旋混合1 min,过微孔滤膜后,供HPLC测定。
6. 高效液相色谱测定
HPLC 参考条件
a) 色谱柱:C8柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm,或相当者;
C18柱,250 mm×4.6 mm(i.d.),5 μm,或相当者。
b) 流动相:C8柱,离子对试剂缓冲液(3.2.10)-乙腈(85+15,体积比),混匀。
C18柱,离子对试剂缓冲液(3.2.10)-乙腈(90+10,体积比),混匀。
c) 流速:1.0 mL/min。
d) 柱温:40℃。
e) 波长:240 nm。
f) 进样量:20 μL。
7. 分析
用GB/T 22388—2008标准检测方法分析,使用天津恒奥的设备测得样品的回收率结果如下:
添加水平(mg/Kg) 回收率
空白
2 116%
4 108%
6 92%
8 96%
由上表可以看出:使用天津恒奥设备处理样品,不仅可以提高分析样品的速度而且还可以得到满意的回收率。

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